微生物致病菌檢測儀-李斯特菌檢測試劑盒操作說明書
單增李斯特菌快速檢測試劑盒是本試劑盒基于公司科研團隊諸多創新性成果，針對快速檢測需求，實現在恒定溫度條件下的快速檢測，通過配套機器微生物致病菌檢測儀快速判讀結果。
【預期用途】
李斯特菌檢測試劑盒可用于單增李斯特菌快速檢測和篩查。
【產品特點】
1. 反應速度快，僅需 60 min。
2. 操作簡單，快速判讀。
3. 靈敏度高，本試劑盒檢測限為10CFU/mL。
4. 特異性高，*的多重體系降低假陽性的出現。
【試劑組成】
序號 名稱 規格 數量/支
1 試劑預混液（深色遮光管） 750μL 1
2 生物酶（黃蓋管） 100μL 1
3 封閉劑（透明蓋管） 300μL 1
4 陽性對照（紅蓋管） 100 μL 1
5 快速釋放劑（10毫升保存管） 3ml 1
【實驗需要的器材】
微生物致病菌檢測儀、0.45μm濾膜、擦拭拭子、渦旋振蕩器、離心機、2-20μL移液器、20-200μl 移液器、1.5ml離心管、96孔板、200ul 反應管。
【實驗前準備】
1、將微生物致病菌檢測儀通電并開機；將渦旋振蕩器、離心機通電等待使用；
2、將微生物快速釋放劑、試劑預混液、生物酶、封閉劑、陽性對照從冰箱取出恢復至室溫。試劑預混液自然解凍后渦旋混勻，瞬時離心待用。
3、取出1.5ml離心管若干只，200ul離心管、96孔板冰盒，0.45μm濾膜若干。
【樣品前處理】
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭（每次取試劑前及時更換新的吸頭），以避免污染干擾實驗結果！！！
1、采樣
水樣本每次采樣量為250ml；固體樣本使用拭子在樣本表面及可疑感染處進行擦拭，擦拭前拭子可用純水進行蘸濕處理。
2、水樣本過濾
將上述樣本用孔徑為0.45μm的濾膜進行過濾，將水樣中的微生物截留在濾膜上。
3、微生物釋放
取下濾膜，將濾膜加入到1.5ml離心管中，離心管中加入150-200μL快速釋放劑，渦旋震蕩混勻，100℃條件下熱浴5分鐘；固體樣本擦拭完成后將拭子頭投入1.5ml離心管中，離心管中加入150-200μl快速釋放劑，渦旋震蕩混勻，100℃條件下熱浴5分鐘；熱浴完成后離心管內液體即為待檢測樣本。注：煮沸5分鐘時，離心管應封閉完整，防止崩開。
【實驗步驟】
1、取 n 個反應管（n=樣本數+陽性對照1+陰性對照1），單個反應體系配制如下：
試劑 體系配制
試劑預混液（深色遮光管） 44×（n+1）μL
生物酶 （黃蓋管） 2×（n+1）μL
2、用移液器在一個新的 1.5 mL 離心管中加入上述試劑，渦旋混勻后瞬時離心。在每個反應管中加入46μl混勻后的試劑，加入約10μl封閉劑（透明蓋管）進入反應管中。
3、在上述n個反應管中，用移液器在一個反應管中加入陰性對照（純水即可）4μl，更換吸頭后在下一反應管加入陽性對照（紅蓋管）4μl，再次更換吸頭后在下一反應管中加入待檢樣本4μl，每次加樣均需更換吸頭。每管所得反應總體積為50μl，加樣時吸頭需穿過封閉劑將模板加至反應管底部。蓋緊管蓋，瞬時離心。（吸取及加樣時注意不要產生明顯氣泡）；
4、將準備好的反應管，放置到檢測設備中，按照檢測程序63℃檢測60min。
5、將檢測管放入儀器后，點擊調零，點擊檢測，開始檢測。反應結束后，機器自動判讀，給出陽性或陰性結果，同時可點擊頁面上“圖譜"可觀察各孔光強變化曲線，對給出的結果進行驗證。實驗結果在陽性對照顯示“陽"，陰性對照顯示“陰"的情況下為有效實驗。顯示“陽"即該孔位樣本含有該病菌，顯示為“陰"即該孔位樣本不含該病菌，并同時給出相應定量。若陰、陽性對照反應管結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品公司聯系。
【注意事項及安全提示】
1. 使用本試劑盒前請仔細閱讀說明書。不同批號的產品請勿混合使用，避免反復凍融，請在有效期內使用試劑盒，由于操作不當引起的誤判，以及有此誤判引發的其他事項，本公司概不負責。
2. 檢測空間應嚴格分區操作，在空間條件允許情況下，試劑配置區用于配置反應所需要的所有試劑；樣品前處理區用于待測樣品的處理及加樣；擴增觀察區用于反應進行和結果判讀。各區內空間獨立，試驗用品專用，避免交叉污染。另外，樣品處理區建議配備超凈工作臺，所有步驟嚴格按照說明書的要求進行。
3.加樣時應盡量避免產生氣泡，反應前注意觀察反應管是否蓋緊，以免泄露，造成污染。實驗中所使用的離心管、吸頭應保證無菌、無污染。試劑盒內陽性對照應視為具有污染性物質，應避免污染其它樣本和反應試劑，導致錯誤檢測結果。
4. 檢測過程中建議穿潔凈工作服，帶一次性手套，使用的槍頭需提前滅菌。
5. 陽性對照可能會作為污染源，污染其他試劑和待檢樣品，導致出現假陽性結果，在加樣過程中建議最后加入陽性對照。
6. 上機前注意檢查反應管是否蓋緊，以免泄漏污染儀器。在反應結束后切忌開蓋，以防氣溶膠污染。
7. 試劑盒使用完畢廢棄時按照廢棄物相關規定處理，由使用者自行負責處理。
8. 工作臺及各物品定期用 1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈處理。
【貯存方法及有效期】
1、本品應貯存在溫度-20℃范圍內
2、有效期6個月
3、生產日期見盒裝標簽
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